• 454 yöntemi, tek bir günde bir milyar baza ulaşana eşdeğer DNA parçalarını dizileyebilir. Bu uzunluk, insan genomunun 1/3'ü kadardır.

• İnsan Genomu Projesi'nde DNA dizilemek için kullanılan yöntemlerden çok daha hızlı ve düşük maliyetlidir.

• Bununla birlikte, bu platformun da kendi zayıf yanları var. Özdeş bazların yinelemeli dizilerinde, ayırt etme güçlükleri olabiliyor.

454 DNA Dizileme Nasıl İşliyor?

• Süreç, çift sarmallı bir DNA örneği ile başlıyor.

• DNA, restrüksiyon enzimleri ile yaklaşık 400 ile 600 arasında değişen baz çiftlik parçalara ayrılıyor.

• Uyumlandırıcılar (İng. adaptors) olarak adlandırılan kısa DNA dizilimleri, bu DNA parçalarına ekleniyor.

• Karışıma küçük reçine boncukları katılıyor.

• Boncuklar üzerindeki DNA dizilimleri, uyumlandırıcıların üzerindekileri bütünleyici oluyor ve böylece DNA parçalarının doğrudan boncuklara bağlanması sağlanıyor.

• DNA parçaları boncukların üzerindeki DNA'lara bağlandığında, çift sarmalı bir arada tutan bağlar kırılıyor ve iplikler ayrılıyor. Tek iplikli DNA haline geliyorlar.

• Ardından DNA parçaları, polimeraz zincir tepkimesi olarak bilinen bir tepkime ile her boncuk üzerinde sayısız kez kopyalanıyor. Böylece DNA diziliminin milyonlarca özdeş kopyası oluşuyor.

• Sonra boncuklar filtre edilerek, herhangi bir DNA'ya bağlanamayanlar ya da birden fazla çeşit DNA parçası barındıranlar ayıklanıyor.

• Geriye kalan boncuklar, dizileme tepkimesi için gerekli olan DNA polimeraz ve primer içeren enzim boncuklarıyla birlikte, bir dizileme tabağındaki kuyulara konuyor; her kuyuda bir boncuk olacak biçimde.

• Polimeraz enzimi ve primer, boncuklardaki DNA parçalarına bağlanıyor.

• Nükleotit bazları, her seferinde bir çeşit baz olacak şekilde dalga dalga kuyulara ekleniyor.

• Herbir baz DNA ile birleştiğinde ışık tutularak kameraya alınıyor.

• Işığın yoğunluğu, yerleşen nükleotitlerle aynı türdekilerin sayısına denk geliyor. Örneğin eğer ard arda üç A dizide bulunuyorsa, üretilen ışık tek A içeren parçadan üç katı oluyor.

• Işık yoğunluğunun deseni çizilerek, orijinal DNA parçasındaki dizilim çözülebiliyor.